工程院食品安全院士团队

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洁净手术室作为医院感染防控的关键环节，其空气微生物浓度的稳定性直接关系手术安全与患者预后。然而，在实际运行中，因运维管理疏漏、人员操作不规范及净化空调系统长期运行导致的过滤器性能衰减等问题，可能引发洁净度参数偏离设计标准，增加术后感染风险。因此，定期开展浮游菌监测是维持洁净环境的核心措施之一。

我们推荐使用环凯牌浮游微生物采样器（HKM-IIIB）对手术室进行采样，HKM-IIIB型浮游微生物采样器是一种高效的多孔吸入式浮游微生物采样器。该设备基于Andersen撞击原理，等效6级，撞击速度达20m/s，可高效捕获≥1μm的微生物颗粒，采样效率≥95%。采集头口风速与洁净室内风速一致，确保微生物浓度检测的准确性。采集样本时，空气携带颗粒高速撞击在培养皿内的培养基表面，培养基为细菌创造了保持活性的最佳环境，保证了测定结果精确可靠。

其核心优势包括：

1，等速采样设计：采集口风速与洁净室风速一致，确保微生物浓度检测准确性；

2，智能功能：3.5寸触控屏支持采样量10-6000L、采样地点代码等参数设置，并通过手机蓝牙远程控制；

3，数据可追溯性：自动存储8000条记录，支持电脑端数据导出；

4，自动流量补偿：误差≤2%，避免因培养皿差异导致的数据偏差。

采样准备工作如下：

1、被测试手术室（洁净室）温、湿度须达到规定的要求；静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。

2、对单向流测试应在净化空调系统正常运行不少于10min；非单向流不少于30min后开始。

3、静态测试时，室内人员不多于2人。采样时测试人员应在采样口下风侧，并避免遮挡气流。

4、测试人员应按无菌操作规程进行。采样口、培养皿及操作工具需用75%乙醇擦拭消毒，消毒后空置≥5min。

5、测试人员必须穿戴符合洁净级别的洁净服。

6、浮游菌测试前，被测手术室（洁净室）已经过消毒，且消毒后静置≥15min。

以上准备好时，我们使用HKM-IIIB采样器采样步骤：

1、在有平台的洁净室内编制培养皿（XX洁净室，XX测点），操作前应用浸湿75%乙醇的医用脱脂棉花擦拭平台。测试人员双手用同样方法严格消毒。在编制过程中再次仔细检查培养基平皿的质量，有变质、破损或污染不能使用。

2、用浸湿75%乙醇的医用脱脂棉花擦拭采样器的采样口、采样管、采样器的顶盖、转盘及罩子内外表面，擦拭后静置≥1min待乙醇挥发。

3、采样器经消毒后不放入培养皿，启动仪器空转运行不少于5min（流量100L/min），使仪器中的残余消毒剂蒸发，并校准流量传感器。

4、根据手术室的洁净度级别设定采样量，采样器的流量（100L/min）X 采样时间（min）= 采样量（L）。最小采样量如下：

   ♦ 百级（ISO 5级）：≥1000L
   ♦ 千级（ISO 6级）：≥500L
   ♦ 万级（ISO 7级）：≥250L

5、放入培养皿，盖上盖子后调节采样器缝隙高度。采样操作时，培养皿应轻拿轻放，用“五指抓拿”培养皿外径，尽量避免人为对样本造成污染。

6、采样点的布置及采样点数量：测点位置离地面0.8m~1.5m；送风口测点位置离开送风口面0.3m左右。最少采样点数如下：

   ● 百级（ISO 5级）：≥5点（按房间对角线5点法布置）
   ● 千级（ISO 6级）：≥4点（按房间中心+四角法布置）
   ● 万级（ISO 7级）：≥3点（按房间中心三角法布置）

 7、正式启动HKM-IIIB采样器

   1、按触控屏“采样键”或通过手机蓝牙小程序进入参数设置界面，屏幕默认显示最近一次采样参数（含采样量、地点代码、延迟时间）。
   2、按“选择键”切换至目标参数组（支持99组预存方案），通过上下键调整采样量（10-6000L）、采样延迟时间（0-60min）及地点代码（如“OR-3-1”代表3号手术室1号点）。
   3、确认参数后，按“启动键”开始采样：
      ▶ 采样延迟倒计时结束后，仪器自动运行（屏幕实时显示剩余采样量及进度条）；
      ▶ 到达设定采样量后，泵机自动停止，数据（含时间、地点、温湿度）存储至本地（支持8000条）并同步至手机端；
      ▶ 若需中途停止，长按“暂停键”2秒，数据仍自动保存。

8、培养

   ★ 8.1，将采样后的培养皿轻放于无菌平台，倒置放置，用灭菌记号笔标注采样点信息（如“OR-3-1-20231001”）。
   ★ 8.2，使用高压灭菌牛皮纸包裹培养皿（单层包装），装入专用消毒转运盒，于2-8℃避光保存。
   ★ 8.3，在生物安全柜内，双手经75%乙醇消毒后，将培养皿倒置于恒温培养箱（35℃±1℃）培养48±2小时。

9、菌落计算

9.1 计数方法：
   ● 肉眼初判：在自然光下统计菌落数（直径≥0.5mm）；
   ● 辅助复检：使用环凯SmartCounter Pro菌落计数仪（5-10倍放大+AI识别），自动标记重叠菌落（如2个菌落重叠仍计为2个）；
   ● 争议处理：两名检测员独立计数，差异＞10%时重新判读。

9.2 填写《浮游菌检测记录表》（含以下字段）：
   ● 采样时间、地点、洁净度等级；
   ● 采样量（L）、菌落数（CFU）、计算浓度（CFU/m³）；
   ● 操作人员签名及审核人确认。

10、结果计算

浮游菌浓度计算公式：浓度（CFU/m³）= 菌落数（CFU） / 采样量（m³）
注：1m³=1000L，若采样量为1000L，则直接取菌落数为浓度值（例：菌落数5 → 5 CFU/m³）。

注意：
1)、每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选的评定标准中关于细菌浓度的界限。
2)、若某测点的浮游菌平均浓度超过评定标准, 则必须对此区域先行消毒, 然后重新采样两次。再次测试结果必须合格。